par Dufour, Damien 
Président du jury Vermijlen, David
Promoteur Van Antwerpen, Pierre
Co-Promoteur Neve, Jean
Publication Non publié, 2018-06-15
Président du jury Vermijlen, David
Promoteur Van Antwerpen, Pierre
Co-Promoteur Neve, Jean
Publication Non publié, 2018-06-15
Thèse de doctorat
| Résumé : | L’importance de la prévalence des maladies cardio-vasculaires dans les pays industrialisés fait de l’amélioration de nos connaissances par rapport à leur physiopathologie, un des challenges les plus importants des années à venir. Même si les traitements actuels visent à une amélioration du pronostic, des études approfondies des multiples mécanismes inhérents à l’instauration de l’athérosclérose apportent de nouvelles pistes de cures.L’importance des low density lipoproteins (LDLs), et plus spécifiquement des LDLs oxydées par la myeloperoxydase (MPO) dans la mise en place de la pathologie, nous a poussé à investiguer leur rôle dans l’athérosclérose et en particulier la réponse des cellules endothéliales soumises à cet inducteur de dysfonction endothéliale.Nous avons voulu étudier l’importance des dérivés d’oméga-3 de type acide docosahexaénoïque (DHA) et plus particulièrement de la résolvine D1 (RvD1) récemment découverte comme étant un inducteur de résolution inflammatoire.Afin de pouvoir évaluer les modulations de la RvD1 et de ses précurseurs DHA et 17S-HDHA, nous avons mis au point une méthode de purification des matrices biologiques complexes, suivie d’une quantification par spectrométrie de masse couplée à la chromatographie liquide (LC/MS-MS).La littérature n’offrant que des méthodes difficilement reproductibles et aux résultats parfois discutables, nous avons opté pour une purification par extraction liquide/liquide qui a montré de très bons résultats lors de sa validation.Par l’utilisation de cette méthode, nous avons pu apprécier les effets de la MPO, et plus particulièrement des LDLs oxydées par la MPO sur les cellules endothéliales, dans l’induction d’une réponse pro-résolutive caractérisée par une augmentation de la RvD1. Cet effet favorable induit par la MPO a été comparé à un autre modèle d’oxydation des LDLs par le cuivre (Ox-LDLs), sans résultat, attestant par-là le caractère spécial des Mox-LDLs dans une initiation de résolution.Nous avons également mis en évidence un effet synergique de ces Mox-LDLs qui, une fois associées aux LDLs-natives, permettent une réponse physiologique plus forte avec des taux de RvD1 produits encore plus importants. Encore une fois, les Ox-LDLs semblent dépourvues d’effets.Par la mise en place d’autres tests, nous avons essayé de mettre en lumière le mécanisme permettant l’induction d’un processus pro-résolutif par la libération de RvD1. Nous avons donc testé différents inhibiteurs jugés intéressants ainsi que l’inhibition de différents récepteurs aux LDLs (natives et oxydées) exprimés au niveau des cellules endothéliales. Par l’analyse d’échantillons de plasma issus de souris d’âges différents, nous avons établi une corrélation négative entre l’âge de l’individu et le taux de RvD1 mesuré. Ceci exprime le fait que les défenses mises en place par l’organisme pour un retour plus rapide à l’homéostasie lors d’un processus inflammatoire ont tendance à s’amenuiser avec l’âge. De plus, l’analyse de plasmas de patients soumis à hémodialyse et comparés aux plasmas de volontaires sains nous a permis de mettre en évidence une corrélation négative entre le taux de RvD1 et le nombre de macrophages M1 chez les patients sous hémodialyse, ainsi qu’entre les taux de RvD1 et le ratio chloro-tyrosine/tyrosine chez les volontaires sains.Nous avons donc constaté que la MPO, bien qu’étant un inducteur important de dysfonction endothéliale par son rôle d’oxydation au niveau des LDLs, est aussi un inducteur d’une réponse physiologique favorable à une résolution du phénomène inflammatoire. De plus, les LDLs oxydées par la MPO semblent agir de manière synergique avec les LDLs-nat pour induire cette réponse pro-résolutive sous forme d’une augmentation accrue de résolvine D1. Ce métabolite actif du DHA a la capacité de réduire l’influx de neutrophiles au niveau de la plaque et de favoriser l’expression phénotypique M2 des macrophages, bien connus comme étant les macrophages de la résolution. |
