Modélisation de mutations de patients dans l’endoribonucléase LAS1L en levure et en lignées humaines
Mémoire
| Résumé : | Certains patients présentent des pathologies graves, avec des symptômes variés, qui résultent de diverses mutations d’une endoribonucléase, LAS1L. Cette protéine essentielle participe à la biogenèse du ribosome en clivant l’ITS2 du pré-ARNr. Une délétion du gène LAS1L entraine un profil de clivage des pré-ARNr tronqué et l’arrêt du cycle cellulaire. L’hypothèse du laboratoire d’accueil est donc que les mutations LAS1L des patients entraînent des défauts de la biogenèse du ribosome. Dans ce mémoire, l’objectif est donc de caractériser l’impact de ces mutations. À cette fin, la mutation LAS1L a été modélisée en cellules neuronales par CRISPR-Cas9. Les clones obtenus présentent des mutations différentes de celles du patient, mais une accumulation du pré-ARNr contenant l’ITS2 et une protéine LAS1L stable. Suite à ces résultats, une deuxième modélisation en HCT116 a été réalisée, mais doit être réitérée. La mutation a ensuite été étudiée en levure afin de tester si LAS1L et ses mutants, introduits par un plasmide exprimant le promoteur de Las1p et LAS1L, pouvaient complémenter une souche conditionnelle pour Las1p, sa protéine homologue. Les tests de suppression doivent encore être réalisés. Si l’hypothèse est fondée, cela permettrait d’ouvrir la voie vers la compréhension des pathologies appelées ribosomopathies. |
