Résumé : La tuberculose demeure un problème majeur de santé publique mondiale, aggravé par l’émergence de souches résistantes aux antituberculeux. Dans de nombreuses régions notamment en Afrique, les malades se tournent vers la médecine traditionnelle pour leur prise en charge. Dans ce contexte, la médecine traditionnelle constitue une source précieuse pour l’identification de nouvelles molécules bioactives. Cette étude avait pour objectifs de recenser les plantes utilisées contre la tuberculose à Lubumbashi, d’évaluer leur activité antimycobactérienne, d’établir le profil phytochimique des écorces de racine de Rothmannia engleriana (K. Schum.) Keay, de caractériser et d’évaluer les activités biologiques des composés isolés.L’enquête ethnobotanique réalisée auprès de tradipraticiens de Lubumbashi et de ses environs a permis de recenser et d’identifier 38 espèces végétales. La famille des Fabaceae a été la plus représentée. Dix-sept des 38 espèces recensées ont été soumises à un criblage biologique. Parmi elles, 11 ont montré une activité significative (concentration minimale inhibitrice ≤ 250 µg/mL) contre Mycobacterium smegmatis. De ces 11, 6 se sont également révélées actives contre M. bovis BCG. Quatre espèces sont rapportées ici, pour la première fois, comme antimycobactériennes.L’analyse métabolomique des extraits des écorces de racine de R. engleriana a révélé une abondance de lipides parmi les métabolites primaires et une prédominance des stéroïdes parmi les métabolites secondaires. Les réseaux moléculaires générés ont mis en évidence plusieurs clusters, dont plus de 50 % restaient non annotés. Trois composés ont été isolés de l’extrait hexanique d’écorces de racine de R. engleriana, Deux de ces composés ont montré une activité sur 3 souches des mycobactéries et ont également présenté une cytotoxicité faible à modérée. Cette étude confirme le potentiel pharmacologique de la flore locale et ouvre des perspectives pour l’exploration de nouvelles molécules antituberculeuses issues de la médecine traditionnelle.