Thèse de doctorat
Résumé : Les biosenseurs sont des dispositifs analytiques utilisés pour la détection de reconnaissance moléculaire. Ils consistent en un élément biologique immobilisé en contact intime avec un transducteur approprié qui convertit un signal biochimique en un signal électrique quantifiable. Leur principe est basé sur la reconnaissance d'une ou plusieurs molécules d'intérêt en solution (le ligand), par un composant biologique (le récepteur) étroitement lié au substrat transducteur. Le senseur réagit aux interactions récepteur-ligand et produit un signal mesurable, généralement proportionnel à la concentration du ligand fixé. Les biosenseurs sont déjà utilisés dans beaucoup de domaines différents, notamment dans le domaine médical (diagnostique et thérapeutique), le contrôle de l’environnement, et l’analyse et le monitoring de processus biotechnologiques.

La recherche concerne la mise au point d’un nouveau type de biosenseurs polyvalents à haute performance. Ces senseurs utilisent un élément de transduction optique dont la surface a été fonctionnalisée en vue de permettre la détection sélective d'interactions récepteur-ligand ainsi que le dosage des molécules fixées aux récepteurs. La technique utilisée pour la détection et le dosage est celle de la Spectroscopie ATR-FTIR (Spectroscopie Infra Rouge à Transformée de Fourrier en Réflexion Total Atténuée). Le système permet la détection directe, en temps réel, et sans marquage des molécules ciblées. La spectroscopie ATR-FTIR fournit une analyse des molécules sur base de leur empreinte spectrale infra rouge (IR) caractéristique, ce qui offre une mine d'informations pour identifier les ligands. Ce nouveau système de biosenseur, appelé BIA-ATR (Biospecific Interaction Analysis – Attenuated Total Reflection) est original et offre des avantages majeurs par rapport à la plus part des biosenseurs commercialement disponibles. Il fournit à l’utilisateur le spectre IR entier du ligand étudié, permettant non seulement le dosage quantitatif de ce dernier, mais aussi d’identifier sa nature intrinsèque. Un autre avantage est sa grande sensibilité ; le senseur BIA-ATR peut détecter la fixation de petites molécules et dans certains cas, aussi les réactions chimiques associées.

Le potentiel de cette nouvelle technologie de senseur est évalué dans ce travail par son application à plusieurs systèmes d’intérêt biologique et médical : la détection de protéines en milieux complexes, appliquée à la détection du Facteur VIII de coagulation du sang impliqué dans l’hémophilie de type A ; la fixation d’une petite molécule, le phosphate (phosphorylation), sur l’ATPase gastrique, un récepteur protéique de grande taille responsable de la sécrétion d’acide dans l’estomac et la détection et dosage d’un antibiotique, la vancomycine, utilisé en soins intensifs hospitaliers dans les cas d’infections bactériennes sévères à Staphylocoques dorés.