Président du jury Kauffmann, Jean-Michel
Promoteur Ghanem, Ghanem Elias
;Badran, Bassam ;Journé, Fabrice Publication Non publié, 2015-05-29
| Résumé : | L’espérance de vie des patients atteints de mélanome à haut risque ne peut être prédite d’une façon fiable en se basant sur les analyses d’histopathologies de la lésion primitive et est souvent ajustée durant la progression de la maladie. Notre étude vise à élargir nos observations initiales au niveau des métastases cutanées et d’évaluer la valeur pronostique de tyrosinase related protein 1 (TYRP1) dans les métastases ganglionnaires des patients atteints de mélanome de stades III et IV. TYRP1 est une enzyme mélanosomale qui partage des similitudes structurelles avec la tyrosinase, l'enzyme clé de la mélanogenèse. L’expression de l'ARNm de TYRP1 a été quantifiée dans 104 métastases ganglionnaires par PCR en temps réel et normalisée par rapport à l’expression de l’ARNm de S100B (marqueur reconnu du mélanome) pour corriger l’expression de TYRP1 suivant la charge tumorale de l’échantillon. Le rapport TYRP1/S100B a été calculé et la médiane a été utilisée en tant que valeur seuil. Ensuite nous avons étudié la relation entre les valeurs de TYRP1/S100B, le suivi clinique et les caractéristiques histopathologiques de la tumeur primitive. Un rapport élevé de l’ARNm TYRP1/S100B corrélait significativement avec une survie sans récidive et une survie globale plus courtes, avec une épaisseur de Breslow plus élevée et avec la présence d'une ulcération au niveau de la tumeur primitive. En outre, une expression élevée de TYRP1/S100B était de meilleure valeur pronostique pour la survie globale que l'épaisseur de Breslow et l'ulcération des primitifs. De plus, cette expression est bien conservée au cours de la progression de la maladie par rapport aux groupes de TYRP1 bas/élevé. Nous avons constaté qu’une expression élevée de TYRP1/S100B dans les métastases de patients atteints de mélanome est associée à un résultat clinique défavorable et une survie courte. Menée sur des patients atteints d'un mélanome à haut risque de récidive, cette première étude a suggéré que l'ARNm de TYRP1 dans les métastases pourrait servir de biomarqueur pour affiner le pronostic initial des patients surtout ceux ayant des lésions primitives de localisation inconnues ou non évaluables et peut permettre une gestion différente des deux groupes de patients. Son expression conservée au cours de la progression de la maladie est en faveur de son utilisation comme cible thérapeutique. En second lieu, en évaluant l’expression de la protéine TYRP1 par immunohistochimie dans les métastases cutanées et ganglionnaires, nous avons observé qu’elle n'était pas détectée dans la moitié 7 des tissus exprimant bel et bien l'ARNm correspondant et qu’elle, contrairement à l'ARNm, n’était pas associée à la survie. Des données récentes ont indiqué que le 3'-UTR de l’ARNm de TYRP1 contient trois sites de liaison putatifs de miR-155 dont deux présentant un polymorphisme d'un seul nucléotide (SNPs: rs683 et rs910) qui favorisent la dégradation en cas d’hybridation miARN-ARNm parfaite de l’ARNm ou non en cas d’hybridation imparfaite. Nous avons cherché à examiner si miR-155 peut affecter l’expression de l’ARNm et de la protéine TYRP1 en fonction de ces SNPs. Tout d'abord, nous avons transfecté deux lignées de mélanome ayant chacune l’une ou l’autre de l’allèle (au niveau rs683 et rs910) avec différentes concentrations de pré-miR-155 et nous avons évalué l’expression du miR-155 et l’ARNm TYRP1 par PCR en temps réel ainsi que l’expression de la protéine TYRP1 par western blot. Nous avons constaté qu’une surexpression de miR-155 a induit une dégradation importante des ARNm TYRP1 et a perturbé sa traduction en protéine dans la lignée avec le génotype “hybridation parfaite”. Ensuite, nous avons examiné l'expression des ARNm et protéines de TYRP1, le niveau de miR-155 et les SNPs rs683 et rs910 dans 192 échantillons de métastases cutanées et ganglionnaires de mélanome. Nous avons trouvé que le groupe d'échantillons avec le génotype “hybridation parfaite” était significativement associé à un niveau de protéine de TYRP1 plus bas alors qu'aucune différence de niveau d’expression n'a été trouvée pour l’ARNm de TYRP1 ou miR-155 entre les deux groupes de génotype, confirmant que les SNPs au niveau de 3’- UTR de TYRP1 peuvent spécifiquement affecter l'expression de la protéine TYRP1. En outre, nous avons montré que l’ARNm de TYRP1 est inversement corrélé avec l’expression miR-155, mais pas avec la protéine TYRP1 dans le groupe " hybridation parfaite", alors qu'il corrèle positivement avec la protéine mais pas avec miR-155 dans le groupe "hybridation imparfaite" où la protéine corrélait inversement à la survie. Cela montre que les SNPs dans le 3'-UTR de l'ARNm TYRP1 affectent la régulation de l’ARNm par miR-155 et la traduction en protéine. Ces SNPs rendent la régulation de l’ARNm et la protéine de TYRP1 indépendante de miR-155 et confèrent une valeur pronostique à la protéine TYRP1 |
